遺伝子解析システムCEQ 8800/8000 /　GeXP 試薬及び消耗品一覧/ベックマン・コールター

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革新的なプライマーストラテジーが、複数遺伝子の発現定量を同時解析することを可能にしました。コスト・時間の問題で最低限に抑えていた遺伝子数を、研究興味のある最大限の遺伝子数に拡充することができます。マルチプレックスでデータを取得するので、所要時間を大幅に短縮します。

キメラプライマーを使った独自のプライマーストラテジーで、複数遺伝子の発現を同時に定量

1反応で最大30遺伝子の発現定量解析を一度に行います
マルチプレックス遺伝子発現定量解析でハイスループット・ローコストを実現しました
キャピラリー電気泳動システムを使用するので、高い遺伝子特異性が得られます
必要なトータルRNA量はわずか5～20ngなので、RNA抽出に要する時間も最小限に抑えられます

How Quick / 迅速

Story 1
133のジェネティックバックグラウンドのサンプルで155遺伝子の発現定量解析を行う場合、一般的な定量PCRで全てのデータを得るまでにかかる日数＝618日⇒GeXPの場合わずか11日

Story 2
68のウイルスORF で5つのマルチプレックスパネルを作製。 GeXP導入後6ヶ月で論文発表

正確・再現性

0.5倍の発現比の違いも検出可能です。

HuBC(ヒト乳がん組織由来)RNAを0.5倍ずつ濃度が異なるRNAを調製し、GeXPの実験を行いました。実験結果から計算された理論RNA量（GEQ）と実際に使用したRNA量には高い相関が認められました。このグラフは結果の一例を示していますが、同一アッセイで行った24遺伝子全てで同様に高い相関が得られました(表)。
生物学的に有意な小さな違いも検出できます。

24遺伝子で実験を行った代表的な結果

RA:Relative Accuracy= (RNA amount ?Abdoluyrz(RNA amount-GEQ value))/RNA amount X100

GeXPで得られた定量結果には高い信頼度があります。

発現定量実験を評価する上で使われるRNA－Micro Array Quality Controlで実験を行いました。サンプルAはヒトユニバーサルリファレンスRNA、サンプルBはヒト脳リファレンスRNAを使用しています。サンプルC、DはこれらのRNAを3：1、1：3に調製しています。Cp、DpはサンプルA、Bから計算されたサンプルC、Dの予測発現量を示しています。実際に測定した結果Cm、Dmはこの予測値に非常に近い値が得られました。正確さを計算すると同じアッセイ系に入っている全ての遺伝子で92%以上の正確さを得ることができました。

How Sensitive 高感度

１つの細胞から複数遺伝子の発現定量を可能にしました。

たった一つの細胞のRNAから複数遺伝子の発現定量ができます。
今、問題になっているセルラインの単一性を確認するための最適なテクノロジーです。

How Specific / 特異性

特異性の高い遺伝子発現定量

個々の遺伝子は、フラグメントサイズで同定され、そのピークの高さは遺伝子の発現量を反映します。
フラグメントサイズの検出により、PCR 産物の遺伝子特異性がより確かなものとなります。

ジーンファミリーなど、相同性の高い遺伝子でも確実に目的とする遺伝子を発現定量します。
アルタネイティブスプライシングで生じるさまざまなバリアントの発現も、同時に定量できます。

プライマーの特異性は確認されていますか?

1つのプライマーでシュードジーンやトランスクリプトバリアントなど同時に検出している場合もあります。アガロースゲルでは分離できないわずかにサイズが異なる目的外の遺伝子でもGeXPでは1ベースのサイズ違いのPCR産物も確実に検出できます。GeXPではサイズで遺伝子を分離するので目的とする遺伝子の発現のみを定量できます。

How to Work / テクノロジー

キメラプライマーを使った独自のプライマーストラテジー

配列特異的な部分とユニバーサルな部分を持つキメラプライマーを使った、ユニークなケミストリーを使用しています。配列特異的なプライマーで逆転写反応を行うため、特異的かつハイセンシティビティのcDNA が合成されます。ユニバーサル配列が組み込まれたPCR テンプレートはたった1 組のユニバーサルプライマーで均一に増幅されるため、プライマーによる発現のバイアスが起こりません。