RNAdvance Tissueは、組織切片や培養細胞から、高純度にRNAを抽出・精製する試薬キットです。特にBiomekによる自動化処理用に開発されました。軟組織や、脂質、繊維質を多く含む様々な組織切片や培養細胞から効率的にRNAを回収します。SPRI磁性ビーズの採用により自動化に最適で、多くの場合、カラムベースによる抽出法に比べてより高純度のRNAを効率的に回収します。
- 組織切片・培養細胞からのRNA自動抽出・精製用に開発された試薬キット
- 軟組織や、脂質、繊維質を多く含む様々な組織切片や培養細胞に対応
- 高純度のRNAを抽出・精製
- ゲノムDNAを含む夾雑物を効率的に除去
- 人体・環境に有害な有機溶媒を使用しない
高回収率
10mgのラット肝臓組織からRNAを抽出した場合、他社製品に比べて3倍（キットQの場合）もしくは2倍（キットAの場合）の回収量を得ました（Figure 1.）。
Figure 1. RNAdvance Tissue キットと他社製品の比較。10 mg のラット肝臓から96ウェルフォーマット（それぞれN = 24）でRNAを抽出した。
また、細胞からのRNA抽出では、繊維質や脂質、RNAse量の違いなど、様々な要因により抽出効率が左右されます。RNAdvance Tissue は、様々な組織や培養細胞からRNAを効率的に抽出します。Figure 2.は、繊維質や脂質を多く含むものも含め、5つの組織切片からRNAを抽出した結果を示しています
Figure 2. RNAdvance Tissueキットを用い、ラットの異なる組織から、Biomek による自動抽出でRNA を得た（肝臓はN＝24、その他の組織はN = 8）。
高純度のRNA
高品質のRNAが得られたかどうかを確認するのに定評のある方法のひとつが、Agilent社製バイオアナライザを用いた品質評価です。この手法では、28Sと18Sのピークに肩が無くシャープで、ベースラインが低いことが分解されていないことが高品質のRNAであることを示します。また、バイオアナライザはRNAの品質をRNA Integrity Number (RIN) としてスコアリングします。Figure 3に示すように、RNAdvance Tissue キットを用いて組織切片から抽出・精製したRNAは、ピークがシャープでベースラインが低いとともに、RIN値が極めて高く、高品質であることが分かります。
Figure 3. RNAdvance Tissue キットにより抽出･精製したRNAの品質評価。トレースデータと、RIN値を記した。
ゲノムDNAのコンタミネーションが無い
Figure 4ではゲノムDNAのコンタミネーションが無いことを確認するために、下記の実験を行いました。まずRNAdvance Tissue キットにより抽出･精製したRNAを、逆転写酵素を含むものと含まないものの２つの系に分け、反応しました。続いて、β-アクチン遺伝子を増幅するプライマーセットによりPCR反応を行いました。逆転写酵素を含まないサンプルからは、β-アクチン遺伝子の増幅が見られない (Figure 4、右) ことから、RNAにはゲノムDNAのコンタミネーションが無いことが確認できます。また、逆転写酵素を加えた後にPCR反応を行った結果 (Figure 4、左) は、得られたβ－アクチン遺伝子の増幅はcDNAによるもののみであることを示しています。
Figure 4. 10mgのラット肝臓から得た1μLのRNAを用い、400 bpのβ-アクチン遺伝子を増幅するプライマーセットにより、35サイクルでPCR反応を行った。左図：レーン1～10はRNAに逆転写酵素を加えたもの、レーン11はRNAを含まずに逆転写酵素を加えたコントロール。右図：レーン1～10は、RNAに逆転写酵素を加えなかったもの。レーン11はRNA、逆転写酵素ともに加えなかったコントロール。
実験ステップ
- マニュアルプロセス：
AおよびB．サンプルにLysisバッファを加え、機械的にホモジナイズし、プロテアーゼKでタンパク質を分解する。 - 1．RNAdvance Tissueを加える。
- 2．SPRI磁性ビーズを磁気で分離し、夾雑物を除く。続いてエタノールで洗浄。
- 3．DNaseIを加える（オプション）。
- 4．リバインディングバッファーを加える（３で、DNaseIを加えた場合のみ必要なステップ）。
- 5．SPRI磁性ビーズを磁気で分離し、夾雑物を除く。続いてエタノールで洗浄。
- 6．SPRI磁性ビーズに結合した核酸を溶出する。
Agencourt RNAdvance Tissue オーダーインフォメーション
| 製品名 | 製品番号 | 容量 | 内容構成 | 価格（税別） |
|---|---|---|---|---|
| Agencourt RNAdvance Tissue Kit - Small | A32645 | 50サンプル分 | Lysis Buffer Bind Buffer Wash Buffer Proteinase K Proteinase K Buffer |
\30,000 |
| Agencourt RNAdvance Tissue Kit - Medium | A32649 | 96サンプル分 | Lysis Buffer Bind Buffer Wash Buffer Proteinase K Proteinase K Buffer |
\48,000 |
| Agencourt RNAdvance Tissue Kit - Large | A32646 | 384サンプル分 | Lysis Buffer Bind Buffer Wash Buffer Proteinase K Proteinase K Buffer |
\138,000 |
